مقایسه حساسیت دو روش real-time pcr و rt-pcr برای تشخیص ویروس بیماری زای طیور

بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماری های ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. با توجه به اینکه روش های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، هدف از انجام این مطالعه استفاده از تکنولوژی های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می باشد. استخراج rna از واکسن نیوکاسل سویه b1 و با استفاده از کیت rnease mini (شرکت کیاژن، آمریکا) و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. rna استخراج شده با 109×68/23 رونوشت اولیه به صورت سری رقت های100 میکرولیتری برای انجام واکنش rt-pcrو real-time pcr تهیه شد. انجام واکنش rt-pcr با استفاده از کیت rnease mini و واکنش real-time pcr با استفاده از کیت تجاری (شرکت genekam biotechnology ،آلمان) انجام شد. برای روش real-time pcr تا سری رقت تهیه شده 34-10 تکثیر صورت گرفت و برای روش rt-pcr تا سری رقت تهیه شده 20-10 بر روی ژل آگارز 5/1 درصد باند مشاهده شد. بر اساس نتایج مشاهده شده، روش real-time pcr قادر به تشخیص 34-10×1 رونوشت و روش rt-pcr قادر به تشخیص 20-10×1 رونوشت از نمونه اولیه است. می توان گفت حساسیت روش real-time pcr تقریباً 2 برابر روش rt-pcr است و در مقایسه با روش rt-pcr، قادر به تشخیص ویروس بیماریزای نیوکاسل در نمونه های آلوده ای با 10000 برابر رونوشت کمتر از rna ویروسی می باشد. از اینرو، این روش به عنوان یک ابزار تشخیصی حساس و مطمئن برای بکارگیری در طرح های ریشه کنی بیماری نیوکاسل پرندگان توصیه می شود.